蛋白質分離純化步驟（二） 2.4.3. 親和層析 親和層析（affinity-chromatography）分離技術是根據許多蛋白質對特定的化學基團具有專一性結合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質所識別并與之結合的基團稱為配基或配體（ligand）。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質的方法。例如酶對它的底物具有特殊的親和力；抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A（concanavalin A）的分離純化為例，由于該蛋白對葡萄糖有專一性親和吸附，因此可把葡萄糖通過適當的化學反應共價地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質大分子與其配基的結合，在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂（或稱為間隔臂，spacerarm），使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱，四川樣品前處理蛋白純化系統。當含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部，四川樣品前處理蛋白純化系統，并沿柱從上往下過時，四川樣品前處理蛋白純化系統，待純化的蛋白質與其特異性配基結合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能與葡萄糖配基結合將通過柱子而流出（圖2-28a）。然后采用一定的洗脫條件，如濃的葡萄糖溶液進行洗脫，即可把該蛋白質洗脫下來，達到與其它蛋白質分離的目的。四川樣品前處理蛋白純化系統

蛋白質分離純化步驟 蛋白質分離純化的一般原則： 大多數蛋白質在組織細胞中都是和核酸等生物分子結合在一起，而且每種類型的細胞都含有成千上萬種不同的蛋白質。許多蛋白質在結構、性質上有許多相似之處，所以蛋白質的分離提純是一項復雜的工作。到目前為止，還沒有一**成的方法能把任何一種蛋白質從復雜的混合物中提取出來。但是對于任何一種蛋白質都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質提純的目的是增加產品的純度和產量，同時又要保持和提高產品的生物活性。因此，要分離純化某一種蛋白質，首先應選擇一種含目的蛋白質較豐富的材料。其次，應設法避免蛋白質變性，以制備有活性的蛋白質。對于大多數蛋白質來說，純化操作都是在0～4℃的低溫下進行的。同時也應避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外，還要設法除去變性的蛋白質和其它雜蛋白，從而達到增加純度和提高產量的目的。四川樣品前處理蛋白純化系統上門維修

實驗室及中試放大規模蛋白純化系統 Unique Autopure系列蛋白純化系統 主要應用領域 ： – 蛋白純化系統主要應用于單抗、重組蛋白、疫苗、生化 藥、、天然產物和多糖等生物制藥領域。用于生物制品的下游工藝的分離純化。 Unique AutoPure 系列蛋白純化系統 ： 產品特點及優勢： – 模塊化設計，提供多個配置，滿足特殊工藝流程需求 - 低脈動高精度雙柱塞輸液泵 ，保證優異的分離重現性 ; – 全系統與液體接觸的地方均由生物兼容性材料組成、符合FDA、USP VI等相關法規要求 ; – DAD全譜直讀檢測器，避免了傳統的機械切換式檢測器所帶來的不穩定性及高故障率 ; – 固定波長檢測器燈為長壽命LED燈，壽命大于8000小時，降低維護成本 ; – **技術紫外檢測器流通池，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 高靈敏度在線pH、電導率、紫外檢測器，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 集中了buffer選擇閥，自動進樣閥、柱位閥等自動化組件，提高了純化的自動化程度 ; – 具有柱前、柱后、壓差報警，氣泡傳感器檢測等功能，極大的保護了系統及層析柱的安全性 ; – 層析工作站軟件是一款功能強大、性能先進、高穩定性的色譜數據管理系

蛋白質分離純化步驟（二） 分離純化蛋白質的一般程序 2.1 材料的預處理及細胞破碎 分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有： 1. 機械破碎法 這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。 3. 反復凍融法 生物組織經凍結后，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。

蛋白質分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網狀結構，不同類型凝膠的網孔大小不同。當把蛋白質混合樣品加到凝膠柱中時，比凝膠網孔小的蛋白質可進入網孔內，而大于網孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，而比網孔小的蛋白質可連續不斷地進入網孔內。這樣的小分子不但流經的路程長，而且受到來自凝膠內部的阻力也很大，所以蛋白質越小，從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質的分子大小不同，進入網孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時間不同，從而達到分離的目的。樣品前處理專業蛋白純化系統

四川樣品前處理蛋白純化系統

三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關，也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中，蛋白質分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數（Sedimentation Coefficient）。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數的單位，用S表示，以紀念超速離心法的創始人，瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s。蛋白質的沉降系數大約在1×10—13～200×10—13s范圍內，即1S～200S。四川樣品前處理蛋白純化系統

蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機器人與自動化設備、機械電子設備的研發、生產、銷售及技術咨詢；光學檢測設備、光電產品研發、制造、銷售；實驗室設備、儀器儀表的研發、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務；自營和代理各類商品及技術的進出口業務（限定企業經營或禁止進出口的商品和技術除外）。（依法需經批準的項目，經相關部門批準后方可開展經營活動）的公司，是一家集研發、設計、生產和銷售為一體的專業化公司。公司自創立以來，投身于蛋白純化色譜系統，凝膠凈化色譜系統，制備液相色譜，柱塞泵，是儀器儀表的主力軍。英賽斯不斷開拓創新，追求出色，以技術為先導，以產品為平臺，以應用為重點，以服務為保證，不斷為客戶創造更高價值，提供更優服務。英賽斯始終關注儀器儀表行業。滿足市場需求，提高產品價值，是我們前行的力量。

文章來源地址: http://www.qyzv.cn/cp/2375960.html