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青島RNA提取試劑單價 蘇州君欣生物科技供應

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***更新:2021-01-13 08:18:07

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蘇州君欣生物科技有限公司

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核糖核酸(縮寫為RNA,即Ribonucleic Acid),存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種,即A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。核糖核酸在體內的作用主要是引導蛋白質的合成。人體一個細胞含RNA約10pg(含DNA約7pg)。與DNA相比,RNA種類繁多,分子量較小,含量變化大。RNA可根據結構和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA(20~300nt)包括 miRNA、 SiRNA,青島RNA提取試劑單價、 piRNA、scRNA,青島RNA提取試劑單價、 snRNA、 snoRNA等,青島RNA提取試劑單價,細菌也有小分子RNA(50~500nt)。很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。青島RNA提取試劑單價

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細胞RNA提取的方法:實驗提取步驟:標準Trizol提取步驟為 液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細胞培養皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機溶劑,有效的使有機相和無機相迅速分離。有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機輕輕拿出EP管,以免管內物質震蕩導致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。昆明正規RNA提取試劑單價在提取時,實驗人員需要佩戴口罩和手套等各種防護裝備,以防實驗室污染。

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RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。水相轉移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質。

Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,采用變性劑即內含異硫氰酸胍酚和β-巰基乙醇等變性物質,能迅速破碎細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶。異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強力的蛋白質變性劑,可溶解蛋白質,并使蛋白質二級結構消失,細胞結構降解,**白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。細胞裂解后,細胞釋放出蛋白質、DNA、RNA等物質,再根據它們在不同的PH值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開。RNA的定量計算1.RNA定量方法與DNA定量相似。RNA在260nm波長處有較大的吸收峰。因此,可以用260nm波長分光測定RNA濃度,OD值為1相當于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑,用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對照,根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度:RNA(mg/ml)=40×OD260讀數×稀釋倍數(n)/1000。2. RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0,故根據OD260/OD280的比值可以估計RNA的純度。若比值較低,說明有殘余蛋白質存在;比值太高,則提示RNA有降解。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相。

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RNA提取圍繞DEPC的玄學。單純高壓過的蒸餾水或超純水,基本可以視為無核酸酶活性等級的水。Thermo Fisher公司曾經做一項實驗來說明這個問題。在PBS中加入不同濃度RNase A,高壓或不高壓,后溶解P-32標記RNA 探針。較后數據顯示,除非原始的RNase A的濃度高達1 μg/ml,否則常規高壓過的水,基本檢測不出RNase A活性。當然,Thermo的科學家也很謹慎,說這個結論*適用于RNase A,不能推廣到其他的RNase類型。不使用DEPC來處理RNA實驗相關試劑和耗材,因為太費勁,而且DEPC還有毒性。相關的液體試劑,我會使用從公司購買的Nuclease-free的水來配制。沒有很貴,一小瓶夠用很久。很多時候買各種其他試劑,比如酶、siRNA等,也都會送這樣的水。在耗材方面,直接使用大公司的離心管和吸頭,根本不用擔心核酸酶的問題。他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到較低程度。蕪湖昆明RNA提取試劑

mRNA是依據DNA序列轉錄而成的蛋白質合成模板。青島RNA提取試劑單價

安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會停止運行,我們試圖去控制它們,我們發現了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開始了解它們能做什么。不過,較初發現RNA現象的是一位華人學者,非常可惜,他沒有進一步弄清這是為什么。” 二人發現的是一個有關控制基因信息流程的關鍵機制。人們的基因組通過從細胞核里的DNA向蛋白質的合成機制發出生產蛋白質的指令,這些指令通過mRNA傳送。他們發現一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達。這項技術被用于全球的實驗室來確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。青島RNA提取試劑單價

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