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在溶劑中環(huán)化應(yīng)該用低濃度的多肽以避免多肽的低聚反應(yīng)。頭尾相連式合成環(huán)狀多肽的產(chǎn)率取決于鏈狀多肽的序列。因此,在大規(guī)模制備環(huán)狀多肽前,首先應(yīng)該創(chuàng)建可能的鏈狀先導(dǎo)多肽庫,然后進行環(huán)化以尋找能達到比較好結(jié)果的序列。2、N-甲基化N-甲基化**初出現(xiàn)在天然多肽中,并被引入到多肽合成中以阻止氫鍵的形成,進而使得多肽更加耐受生物降解和***。利用N-甲基化的氨基酸衍生物合成多肽是**主要的方法,另外也可利用N-(2-硝基苯磺酰氯)多肽-樹脂中間體與甲醇進行Mitsunobu反應(yīng),該方法已被用于制備含有N-甲基化氨基酸的環(huán)狀多肽庫。3、磷酸化磷酸化是自然界中**常見的翻譯后修飾之一。在人類細(xì)胞中,超過30%的蛋白質(zhì)被磷酸化,浙江口碑好192引物合成儀銷售,浙江口碑好192引物合成儀銷售。磷酸化,尤其是可逆磷酸化,在控制許多細(xì)胞過程中起重要作用,浙江口碑好192引物合成儀銷售,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達、細(xì)胞周期和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)以及細(xì)胞凋亡。磷酸化可以在各種氨基酸殘基上觀察到,但**常見的磷酸化目標(biāo)是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基[4]。磷酸酪氨酸、磷酸蘇氨酸和磷酸絲氨酸衍生物既可在合成中引入到多肽也可在多肽合成以后形成。使用可選擇性移除保護基團的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基可以實現(xiàn)選擇性磷酸化。
通常在多肽和生物素之間使用6-氨基己酸作為紐帶,紐帶能夠靈活結(jié)合底物,并且在有空間位阻的情況下能結(jié)合地更好。9、熒光標(biāo)記熒光標(biāo)記可用于追蹤活細(xì)胞內(nèi)多肽,也可用于研究酶和作用機制。色氨酸(Trp)帶有熒光,因此可以被用于內(nèi)在標(biāo)記。色氨酸的發(fā)射光譜取決于**環(huán)境,隨著溶劑極性降低而降低,這種性質(zhì)對于檢測多肽結(jié)構(gòu)和受體結(jié)合很有用處[12]。色氨酸熒光可以被質(zhì)子化的門冬氨酸和谷氨酸淬滅,這可能會限制其使用。丹磺酰氯基團(Dansyl)與氨基結(jié)合時具有高度熒光,也常被用于氨基酸或蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記。熒光共振能量轉(zhuǎn)換(FRET)對酶的研究十分有用,應(yīng)用FRET時,底物多肽常含有一個熒光標(biāo)記基團和一個熒光淬滅基團。標(biāo)記的熒光基團會被淬滅劑通過非光子能量傳遞淬滅。當(dāng)多肽從所研究的酶上解離下來,標(biāo)記基團就會發(fā)射熒光。10、籠形多肽籠形多肽有光學(xué)移除性的保護基,光學(xué)移除性保護基可以屏蔽多肽與受體的結(jié)合。當(dāng)受到UV照射時,多肽會被活化,恢復(fù)與受體的親和力。由于這種光學(xué)活化可以根據(jù)時間、振幅或者位置來控制,因而籠形多肽可以被用于研究細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的反應(yīng)[13]。**常用于籠形多肽的保護基是2-硝基芐基及其衍生物。
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