蛋白質分離純化步驟（二） 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質的酸堿性質作為分離的基礎。離子交換纖維素（cellulose ion-exchanger）是人工合成的纖維素衍生物，它具有松散的親水性網狀結構，有較大的表面積，使蛋白質大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質的分離。 （1）羧甲基纖維素（CM-纖維素） 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下，四川專業蛋白純化系統上門維修，羧甲基上的質子可解離下來（圖2-27a），而溶液中帶正電荷的蛋白質分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結合。可交換的基團帶正電，因此是一種陽離子交換劑。蛋白質與離子交換纖維素之間結合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2）二乙氨基乙基纖維素（DEAE-纖維素） 在中性pH條件下，它含有帶正電荷的基團，可與溶液中的帶負電荷的蛋白質結合，可交換的基團帶負電荷，因此是一種陰離子交換劑。當某一蛋白質混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時，帶正電荷的蛋白質不能結合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質將被結合到柱上，四川專業蛋白純化系統上門維修，四川專業蛋白純化系統上門維修。結合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫，改變蛋白質分子所帶的靜電荷，依次從層析柱流出達到相互分離的目的。四川專業蛋白純化系統上門維修

蛋白質分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網狀結構，不同類型凝膠的網孔大小不同。當把蛋白質混合樣品加到凝膠柱中時，比凝膠網孔小的蛋白質可進入網孔內，而大于網孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，而比網孔小的蛋白質可連續不斷地進入網孔內。這樣的小分子不但流經的路程長，而且受到來自凝膠內部的阻力也很大，所以蛋白質越小，從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質的分子大小不同，進入網孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時間不同，從而達到分離的目的。樣品前處理蛋白純化系統上門安裝

    蛋白質純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復雜的生命大分子物質作為配體，它的結合力比較大河吸附選擇性比較強。而通用性配體親和層析法通常將簡單的小分子物質作為配體，因此，它具有低廉的成本，吸附容量比較高，通過對吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物，***-受體與抗原-抗體等特異性反應的機理。有一定的親和力在每對反應物之間。與在酶與底物的反應中，只有特異的底物才可以結合一定的酶，使復合物產生相同。在親和層析中，只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力，并且使復合物產生。親和層析配體呈固相，而酶與底物的反應底物呈液相是它們的不同點。事實上，親和層析是在含有活化基團的基質M上以共價鍵的方式固化具有識別能力的配體L，將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質的能力依然保持。所以當在小層析柱裝入固相載體，使得欲分離的樣品在該柱經過。此時，樣品中對配體有親和力的物質S就能夠通過結構互補效應、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。

三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關，也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中，蛋白質分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數（Sedimentation Coefficient）。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數的單位，用S表示，以紀念超速離心法的創始人，瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s。蛋白質的沉降系數大約在1×10—13～200×10—13s范圍內，即1S～200S。

蛋白質分離純化步驟（二） 2.2 蛋白質的抽提 通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。 2.3蛋白質粗制品的獲得 選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法： 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質，并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉淀出來，因此可用來沉淀蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作.江蘇直銷蛋白純化系統廠家報價

四川專業蛋白純化系統上門維修

經過幾十年的發展，我國已經成為世界上第二大儀器儀表制造國，儀器儀表產業形成了一定的規模，儀器儀表產品也比較豐富。儀器儀表在工業生產過程中扮演著重要的角色，用到各種各樣的儀器儀表，如[ "蛋白純化色譜系統", "凝膠凈化色譜系統", "制備液相色譜", "柱塞泵" ]等為工業的檢驗、測量和計量提供技術支撐。儀器儀表應用領域***，覆蓋了機器人與自動化設備、機械電子設備的研發、生產、銷售及技術咨詢；光學檢測設備、光電產品研發、制造、銷售；實驗室設備、儀器儀表的研發、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務；自營和代理各類商品及技術的進出口業務（限定企業經營或禁止進出口的商品和技術除外）。（依法需經批準的項目，經相關部門批準后方可開展經營活動）等各方面，在國民經濟建設各行各業的運行過程中承擔著把關者和指導者的任務，儀器儀表制造行業可以分為通用儀表儀器制造、**儀器儀表制造、鐘表與計時儀器制造、光學儀器制造和衡器制造。盡管在國家相關政策的引導和支持下，我國儀器儀表行業得到了快速發展。但是從加工整體上看，我國的儀器儀表行業還是落后于國際先進水平的。**技術缺乏、高精尖產品嚴重依賴進口、儀器儀表產品同質化嚴重、生產工藝落后、研發能力弱、精度不高等問題的凸顯，為儀器儀表行業的發展帶來了嚴峻的挑戰。四川專業蛋白純化系統上門維修

蘇州英賽斯智能科技有限公司創立于2017-01-09，是一家生產型公司。公司業務涵蓋[ "蛋白純化色譜系統", "凝膠凈化色譜系統", "制備液相色譜", "柱塞泵" ]等，價格合理，品質有保證。公司從事儀器儀表多年，有著創新的設計、強大的技術，還有一批**的專業化的隊伍，確保為客戶提供質量的產品及服務。截止當前，我公司年營業額度達到50-100萬元，爭取在一公分的領域里做出一公里的深度。

文章來源地址: http://www.qyzv.cn/cp/653263.html