所需儀器：

-86℃超低溫冰箱

離心機

生物安全柜

電動移液器

CO2培養箱

倒置顯微鏡

液氮罐

所需試劑：

胎牛血清（FBS）

細胞培養級 DMSO

凍存液：80%FBS+**MSO

無菌 1×PBS pH=7.2

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

異丙醇

所需耗材：

離心管（15ml、50ml）

T-25 細胞培養瓶

一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）

8ml 凍存管

程序降溫盒

操作步驟：

將需要那凍存的細胞從 CO2培養箱中取出，貴州科默斯凍存盒生產廠家，在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，

吸棄瓶內的培養基；

向培養內加入無菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培養瓶，貴州科默斯凍存盒生產廠家，旋轉震蕩培養瓶，使 PBS

能夠浸潤到培養平面上所都的面積，吸棄 PBS；

重復步驟 2 一次，之后向瓶內加入消化液 1ml，貴州科默斯凍存盒生產廠家，輕微震蕩后放入 37℃CO2培養

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3.根據權利要求I或2所述的程序降溫盒，其特征在于所述管槽(3)與盒身(2)螺紋配合。4.根據權利要求3所述的程序降溫盒，其特征在于所述盒身(2)內下部設有泡沫襯墊 (5)。5.根據權利要求4所述的程序降溫盒，其特征在于所述盒蓋(I)為塑料盒蓋，所述盒身(2)為透明塑料盒身，所述管槽(3)為塑料管槽，所述連接帶(4)為塑料連接帶。**摘要本實用新型公開了一種程序降溫盒，包括盒蓋、盒身和管槽，所述管槽置于盒身內，所述盒蓋蓋于盒身上且與盒身螺紋配合，還包括連接帶，所述連接帶一端與盒蓋連接，另一端與盒身連接；本實用新型設置了連接盒蓋與盒身的連接帶，使盒蓋與盒身不分離，減少了配對標記這一步驟，減少了操作程序，使用更加方便；同時，本實用新型出入超低溫冰箱時，可手提連接帶，減少了手的接觸面積，減少或防止傷害到；另外，管槽與盒身螺紋配合，增加了密封度，防止了異丙醇揮發而導致的凍存效果變差。貴州科默斯凍存盒生產廠家杭州科默斯科技有限公司以質取勝，用心服務。

凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細胞，置于-80，利用異丙醇實現梯度降溫啊。)

根據論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發現很大問題。

經驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。

經驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性0液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數據：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

使用經驗（*供參考）：雖然梯度降溫的起始點是室溫20°左右，但是凍存液里面的DMSO對細胞0性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先預放至4°，等把細胞用凍存液重懸好了放入凍存盒后，立刻轉移到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮。凍存盒中的異丙醇應使用5~7此后更換一次，而且保證液體量不低于250ml刻度線，否則降溫效果會受到影響。異丙醇：無色透明具有乙醇氣味的可燃性、0液體，熔點是-87.9度。請注意其可燃性!杭州科默斯科技有限公司杭州科默斯科技有限公司高水平的服務奉獻社會。

請問梯度凍存盒到底怎么使用？兩種方法：

1、是先把凍存盒放在室溫，把細胞放在凍存盒，置于-80度？（這樣的好處：細胞可以從室溫開始緩慢降溫）（并且，據說凍存盒的使用本來就是從20度室溫開始降）

2、還是將凍存盒先放在4度降溫，再將細胞放進去，放于-80？（這樣的好處：常溫下凍存液中DMSO對細胞損傷大，從4度開始降溫比較好？） 杭州科默斯科技有限公司業有精專，物超所值。蘭州程序凍存盒規格

細胞凍存有兩種方法：傳統的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設定程序由室溫降低至-80℃，后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下：實驗室雖然有程序降溫凍存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我覺得是不是應該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細胞剛開始還沒凍的時候就是室溫)，然后把細胞放進去，再一起移到-80度，這樣才能實現程序降溫呢? 時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用時間長了會不會揮發或變質什么的，要不要添加或維護一下呢，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分，要補充嗎?

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與現有技術相比，本實用新型的有益效果是：該細胞凍存盒，與現有的細胞凍存盒相比較之下，凍存盒本體采用酚醛泡沫材料，輕質、防火、無害，使用溫度范圍廣，保溫性能強，并且凍存盒本體與凍存盒蓋相互咬合連接，增強了密封性，整體的保溫效果好，確保運輸過程中冷氣不會快速流失造成細胞變質的問題，同時采用對稱設置的2個分隔板將凍存管擺放架劃分為三個不同的區域，便于擺放不同孔徑規格的凍存試管，并且凍存管擺放架由四個相同形狀大小的擺放架組合而成，便于進行安裝的同時可調節凍存管擺放架的高度，可針對不同高度的凍存試管進行保存，整體的功能性強。貴州科默斯凍存盒生產廠家

杭州科默斯科技有限公司一直專注于計算機硬件，儀器儀表，機電設備，電子產品，CellHome(程序降溫盒）；CoolHome(無冰工作站）；HolderHome(無冰冷凍箱）；TransHome(干冰運輸箱）；BlockHome(模塊基 座）；IceHome(冰盆冰桶）細胞程序降溫盒，是一家商務服務的企業，擁有自己**的技術體系。唯才是舉，唯能是用：擁有優秀人才11~50人和，是實現企業戰略目標的基礎，是企業持續發展的動力。公司業務范圍主要包括：[ "程序降溫盒", "梯度降溫盒", "無冰工作站", "低溫工作站" ]等。公司奉行顧客至上、質量為首、的經營宗旨，深受客戶好評。一直以來公司堅持以客戶為中心、[ "程序降溫盒", "梯度降溫盒", "無冰工作站", "低溫工作站" ]市場為導向，重信譽，保質量，想客戶之所想，急用戶之所急，全力以赴滿足客戶的一切需要。

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