箱中孵育 2-4min；

孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下

可在生物安全柜內用移液管吸起消化液，吹打培養平面；

向消化下細胞的培養瓶中加入 1ml 含血清的完全培養基終止消化，然后將培養

瓶中的液體轉入 15ml 離心管中，300g 離心 5min；

離心完成后，南昌梯度凍存盒圖片，棄上清，用 0.5mlFBS 重懸細胞，南昌梯度凍存盒圖片，再加入 0，南昌梯度凍存盒圖片.5ml 凍存液，用移液

管充分混勻，之后轉入 1.8ml 凍存管中；

將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。 杭州科默斯科技有限公司立安思危，創優求存。南昌梯度凍存盒圖片

低溫凍存技巧冷凍凝固的過程中，水分會在0℃~-20℃區間形成不同形狀的結晶在細胞凍存時“降溫速度、冰晶形成量和細胞滲透壓改變程度”是凍存成功與否的重要關鍵。降溫速度慢：冰晶由細胞外開始形成，造成胞外滲透壓變小，細胞內水份移動至細胞外造成細胞脫水。降溫速度快：水分流動時間短，細胞內外滲透壓改變程度小，但大量水分留在細胞內造成大量胞內冰晶形成，使得胞器損壞。這些都可能引起細胞損傷、凋亡或壞死，也可能造成復蘇后細胞存活率低、細胞形態改變、細胞功能喪失、基因變異等現象。由此可知，適合的凍存條件為“在增加細胞滲透壓穩定性的溶液中，以慢到能減少胞內冰晶形成，但也足夠快到能預防細胞脫水的降溫速度凍存細胞”。南昌梯度凍存盒圖片杭州科默斯科技有限公司熱情服務，轉變觀念。

請問梯度凍存盒到底怎么使用？兩種方法：

是先把凍存盒放在室溫，把細胞放在凍存盒，置于-80度？（這樣的好處：細胞可以從室溫開始緩慢降溫）（并且，據說凍存盒的使用本來就是從20度室溫開始降）

還是將凍存盒先放在4度降溫，再將細胞放進去，放于-80？（這樣的好處：常溫下凍存液中DMSO對細胞損傷大，從4度開始降溫比較好？）用液氮凍存細胞是醫學、生物學等研究領域常用的技術，目前國內實驗室液氮中存放的凍存盒通常為不透明的盒體，在盒體內設置有多個隔板，形成能插入多個管瓶的空間，能夠儲藏多個細胞樣品。但是現有的細胞凍存盒，保溫效果差，在運輸過程中冷氣快速流失造成細胞的變質，同時凍存管擺放架只可擺放單一結構的凍存試管，功能性弱，并且凍存管擺放架的高度不可調節，無法針對不同高度的凍存試管進行保存。針對上述問題，急需設計一種新型的細胞凍存盒。技術實現要素：本實用新型的目的在于提供一種細胞凍存盒，以解決上述背景技術中提出現有的細胞凍存盒，保溫效果差，在運輸過程中冷氣快速流失造成細胞的變質，同時凍存管擺放架只可擺放單一結構的凍存試管，功能性弱，并且凍存管擺放架的高度不可調節，無法針對不同高度的凍存試管進行保存的問題。

凍存細胞時要緩慢冷凍，程序降溫，以提高細胞的存活率。目前普遍的做法是采用程序降溫儀或程序降溫盒，采用程序降溫儀價格昂貴、操作繁瑣，而程序降溫盒在生物學實驗室中使用，是細胞凍存盒類產品的經典實驗耗材之一。程序降溫盒包括盒蓋、盒身和管槽，管槽置于盒身內，盒蓋蓋于盒身上且與盒身螺紋配合，用之前在盒身與管槽的夾層內裝入異丙醇，能為成功冷凍保存細胞提供精確和良好重復性的冷凍率，可的提高細胞的存活率。但是現有程序降溫盒的盒蓋與盒身是分離的，使用前需要進行配對標記，增加了操作程序，使用不方便；并且現有程序降溫盒出入超低溫冰箱時，取放也不方便，與手接觸時容易傷害到手。杭州科默斯科技有限公司公正監理，誠信服務。

在本實用新型一實施例中，所述冷凍管槽21的深度與存放的凍存管高度相同。

在本實用新型一實施例中，在所述加液管5的頂部安裝擰蓋6。擰蓋平時與加液管為連接狀態，防止有機溶液從加液管漏出。

在本實用新型一實施例中，所述擰蓋6的上端與水平面平行。

在本實用新型一實施例中，所述擰蓋6為圓柱體，所述擰蓋6內部設有內螺紋，所述加液管上端設有外螺紋，所述擰蓋6與加液管5螺紋連接。螺紋連接緊固且易打開。

以上所述*為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，凡在本實用新型的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內。

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我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。經驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性0液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數據：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!南昌梯度凍存盒圖片

杭州科默斯科技有限公司注冊資金200-300萬元，是一家擁有11~50人***員工的企業。公司業務分為[ "程序降溫盒", "梯度降溫盒", "無冰工作站", "低溫工作站" ]等，目前不斷進行創新和服務改進，為客戶提供質量的產品和服務。公司注重以質量為中心，以服務為理念，秉持誠信為本的理念，打造商務服務質量品牌。公司憑借深厚技術支持，年營業額度達到10-30萬元，并與多家行業**公司建立了緊密的合作關系。

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