所需儀器：

-86℃超低溫冰箱

離心機

生物安全柜

電動移液器

CO2培養箱

倒置顯微鏡

液氮罐

所需試劑：

胎牛血清（FBS）

細胞培養級 DMSO

凍存液：80%FBS+**MSO

無菌 1×PBS pH=7.2

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

異丙醇

所需耗材：

離心管（15ml、50ml）

T-25 細胞培養瓶

一次性無菌移液管（2ml、5ml，浙江細胞凍存盒廠家、10ml）

8ml 凍存管

程序降溫盒

操作步驟：

將需要那凍存的細胞從 CO2培養箱中取出，在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，

吸棄瓶內的培養基；

向培養內加入無菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培養瓶，旋轉震蕩培養瓶，浙江細胞凍存盒廠家，浙江細胞凍存盒廠家，使 PBS

能夠浸潤到培養平面上所都的面積，吸棄 PBS；

重復步驟 2 一次，之后向瓶內加入消化液 1ml，輕微震蕩后放入 37℃CO2培養

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低溫凍存技巧冷凍凝固的過程中，水分會在0℃~-20℃區間形成不同形狀的結晶在細胞凍存時“降溫速度、冰晶形成量和細胞滲透壓改變程度”是凍存成功與否的重要關鍵。降溫速度慢：冰晶由細胞外開始形成，造成胞外滲透壓變小，細胞內水份移動至細胞外造成細胞脫水。降溫速度快：水分流動時間短，細胞內外滲透壓改變程度小，但大量水分留在細胞內造成大量胞內冰晶形成，使得胞器損壞。這些都可能引起細胞損傷、凋亡或壞死，也可能造成復蘇后細胞存活率低、細胞形態改變、細胞功能喪失、基因變異等現象。由此可知，適合的凍存條件為“在增加細胞滲透壓穩定性的溶液中，以慢到能減少胞內冰晶形成，但也足夠快到能預防細胞脫水的降溫速度凍存細胞”。天津梯度凍存盒廠家杭州科默斯科技有限公司誠信履約,互相幫助。

使用過程中，支撐凍存架4上開設若干凍存管孔401內裝有細胞凍存管，第二凹槽201和第三凹槽301內的保溫層5能夠對細胞凍存管起到緩慢降溫以及保溫的效果，當細胞數量很多時，可以直接將細胞捆綁，并把支撐凍存架4從凍存盒體內取出，將捆綁好的細胞直接放在凍存盒體2內，使得細胞凍存盒的結構簡單、使用方便。以上所述*為本實用新型的較佳實施例而已，并不用以限制本實用新型，凡在本實用新型的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內。

本實施例中，所述盒蓋I頂部設有向上突出的連接柱11，所述連接帶4的兩端分別設有套環41，所述連接帶4 一端的套環41外套于連接柱11且與連接柱11單自由度轉動配合，另一端的套環41外套于盒身2且與盒身2單自由度轉動配合。 作為本實用新型的進一步改進，所述管槽3與盒身2螺紋配合；增加了密封度，防止了異丙醇揮發而導致的凍存效果變差。本實施例中，所述盒身2內下部設有泡沫襯墊5 ;泡沫襯墊5防止管瓶與異丙醇接觸，避免造成污染或在管瓶上留下痕跡。本實施例中，所述盒蓋I為塑料盒蓋，例如高密度聚乙烯盒蓋；所述盒身2為透明塑料盒身，例如聚碳酸酯盒身；所述管槽3為塑料管槽，例如高密度聚乙烯管槽；所述連接帶4為塑料連接帶，例如高密度聚乙烯連接帶。后說明的是，以上實施例*用以說明本實用新型的技術方案而非限制，盡管通過參照本實用新型的推薦實施例已經對本實用新型進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求書所限定的本實用新型的精神和范圍。杭州科默斯科技有限公司百姓價位，貴族享受。

使用經驗（*供參考）：雖然梯度降溫的起始點是室溫20°左右，但是凍存液里面的DMSO對細胞0性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先預放至4°，等把細胞用凍存液重懸好了放入凍存盒后，立刻轉移到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮。凍存盒中的異丙醇應使用5~7此后更換一次，而且保證液體量不低于250ml刻度線，否則降溫效果會受到影響。異丙醇：無色透明具有乙醇氣味的可燃性、0液體，熔點是-87.9度。請注意其可燃性!杭州科默斯科技有限公司杭州科默斯科技有限公司杜絕不良思想，發揚質量精神。浙江細胞凍存盒廠家

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本實用新型在凍存管架上設置多個容納凍存管的柱形凹腔，一次性冷凍的細胞液較多，便于批量處理，效率較高。降溫盒主體內壁固定一層保溫棉，避免細胞液溫度過快的下降對細胞造成的損傷，同時主體與凍存管架之間加入異丙醇后，可實現-1℃/分的冷凍率，更進一步減緩冷凍時間，實現程序化冷凍，有利于保護細胞，提高存活率。以上詳細描述了本實用新型的較佳具體實施例。應當理解，本領域的普通技術人員無需創造性勞動就可以根據本實用新型的構思做出諸多修改和變化。因此，凡本技術領域中技術人員依本實用新型的構思在現有技術的基礎上通過邏輯分析、推理或者有限的實驗可以得到的技術方案，皆應在由權利要求書所確定的保護范圍內。浙江細胞凍存盒廠家

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