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***更新:2020-05-23 06:30:42
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用還原性斷裂法把多肽同高聚物分離,再用色層法提純。固相法的建立和應用**地促進了多肽合成研究。多肽合成方法分類多肽的合成主要分為兩條途徑:化學合成多肽和生物合成多肽,天津口碑好RNA合成儀哪家比較好。化學合成主要是以氨基酸與氨基酸之間縮合的形式來進行。在合成含有特定順序的多肽時,由于多肽合成原料中含有官能度大于2的氨基酸單體,多肽合成時應將不需要反應的基團暫時保護起來,方可進行成肽反應,這樣保證了多肽合成目標產物的定向性。多肽的化學合成又分為液相合成和固相合成。多肽液相合成主要分為逐步合成和片段組合兩種策略。逐步合成簡潔迅速,可用于各種生物活性多肽片段的合成。片段組合法主要包括天然化學連接和施陶丁格連接。近年,多肽液相片段合成法發展迅速,在多肽和蛋白質合成領域已取得了重大突破。在多肽片段合成法中,根據多肽片段的化學特定性或化學選擇性,多肽片段能夠自發進行連接,得到目標多肽。因為多肽片段含有的氨基酸殘基相對較少,所以純度較高,且易于純化。1963年,天津口碑好RNA合成儀哪家比較好,天津口碑好RNA合成儀哪家比較好,美國***生物化學家Merrifield提出了固相合成法,開展了多肽固相合成,即將氨基酸的C末端(羧基端)連接在不溶樹脂上,然后在此樹脂上依次進行氨基酸的縮合、延長肽鏈。
目前,能夠提供大規模合成儀的廠家主要為GEhealth及國產的pilot500。二、按試劑堿基添加方式分類,DNA合成儀可分為電磁閥氣動驅動,蠕動泵驅動兩種類型。1,電磁閥氣動驅動型:采用高于大氣壓的惰性氣體(氬氣,氮氣或氦氣)為堿基試劑溶液的驅動方式,通過微量電磁閥的開合添加試劑或堿基溶液。主要品牌包括ABI系列合成儀,oligomaker系列合成儀,biolytic系列合成儀,GE系列合成儀及mermade系列DNA合成儀等。2,采用蠕動泵驅動型:采用精密蠕動泵為堿基試劑溶液的驅動方式,通過蠕動泵驅動,滑塊的相互滑動選擇添加不同堿基試劑溶液。主要品牌包括德國POLYGEN系列DNA合成儀。三、按產物承載容器分,可分為需要一次性合成柱,無需一次性合成儀兩類。除德國polygen系列合成儀外,其它所有品牌合成儀,如,oligomaker,mermade,ASM,POLYPLEX,ABI等都使用一次性合成柱作為合成產物的承載容器。
**初是sanger法,后來發展了幾種高通量測序方法1sanger法:雙脫氧測序的原理,DNA合成時加上一個ddNTP從而終止這條鏈的延伸,毛細管電泳讀取分析序列。一般教材講的都是這種方法,經典,讀長800bp,但是通量小成本高。2454:也稱焦磷酸測序,一個run下來約400M的數據量。將emulsionPCR產物連磁珠上,放入PicoTiterPlate,測序反應是通過釋放PPi經過ATP***化酶和熒光素酶作用發光D捕捉拍照,反應是連續的,所以遇到連續的堿基如polyA時,454易產生誤差。3Solexa:邊合成邊測序,將DNA單鏈固定在芯片上,合成DNA簇,是一種可逆阻斷的合成反應,每個循環只加上一個堿基、系統拍照一次。通過讀取拍照信號分析序列,一個run約200個G數據量以上。目前能量比較高,不足是讀長短,現在有PE150,可以測通300bp。4Soild:與454有相似之處,該方法更精細,磁珠富集,磁珠更小,密度更高。它的獨特之處是連接反應測序,加入8堿基熒光單鏈混合物。一次測序讀兩個堿基,獲得顏色編碼組成的堿基序列,通過幾輪反應**終得出序列。5Iontorrent:特點是小巧。試劑通過集成的流體通路進入芯片中,密布于芯片上的反應孔立即成為上百萬個微反應體系。
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