蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.3. 親和層析 親和層析（affinity-chromatography）分離技術(shù)是根據(jù)許多蛋白質(zhì)對(duì)特定的化學(xué)基團(tuán)具有專(zhuān)一性結(jié)合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質(zhì)所識(shí)別并與之結(jié)合的基團(tuán)稱(chēng)為配基或配體（ligand）。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質(zhì)的方法。例如酶對(duì)它的底物具有特殊的親和力；抗原和抗體互為配基，山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇。以伴刀豆球蛋白A（concanavalin A）的分離純化為例，由于該蛋白對(duì)葡萄糖有專(zhuān)一性親和吸附，因此可把葡萄糖通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)共價(jià)地連接到像瓊脂糖凝膠一類(lèi)的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質(zhì)大分子與其配基的結(jié)合，在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂（或稱(chēng)為間隔臂，spacerarm），使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當(dāng)含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部，并沿柱從上往下過(guò)時(shí)，待純化的蛋白質(zhì)與其特異性配基結(jié)合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能與葡萄糖配基結(jié)合將通過(guò)柱子而流出（圖2-28a），山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇，山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇。然后采用一定的洗脫條件，如濃的葡萄糖溶液進(jìn)行洗脫，即可把該蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，達(dá)到與其它蛋白質(zhì)分離的目的。山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

實(shí)驗(yàn)室及中試放大規(guī)模蛋白純化系統(tǒng) Unique Autopure系列蛋白純化系統(tǒng) 主要應(yīng)用領(lǐng)域 ： – 蛋白純化系統(tǒng)主要應(yīng)用于單抗、重組蛋白、疫苗、生化 藥、、天然產(chǎn)物和多糖等生物制藥領(lǐng)域。用于生物制品的下游工藝的分離純化。 Unique AutoPure 系列蛋白純化系統(tǒng) ： 產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)： – 模塊化設(shè)計(jì)，提供多個(gè)配置，滿(mǎn)足特殊工藝流程需求 - 低脈動(dòng)高精度雙柱塞輸液泵 ，保證優(yōu)異的分離重現(xiàn)性 ; – 全系統(tǒng)與液體接觸的地方均由生物兼容性材料組成、符合FDA、USP VI等相關(guān)法規(guī)要求 ; – DAD全譜直讀檢測(cè)器，避免了傳統(tǒng)的機(jī)械切換式檢測(cè)器所帶來(lái)的不穩(wěn)定性及高故障率 ; – 固定波長(zhǎng)檢測(cè)器燈為長(zhǎng)壽命LED燈，壽命大于8000小時(shí)，降低維護(hù)成本 ; – **技術(shù)紫外檢測(cè)器流通池，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 高靈敏度在線pH、電導(dǎo)率、紫外檢測(cè)器，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 集中了buffer選擇閥，自動(dòng)進(jìn)樣閥、柱位閥等自動(dòng)化組件，提高了純化的自動(dòng)化程度 ; – 具有柱前、柱后、壓差報(bào)警，氣泡傳感器檢測(cè)等功能，極大的保護(hù)了系統(tǒng)及層析柱的安全性 ; – 層析工作站軟件是一款功能強(qiáng)大、性能先進(jìn)、高穩(wěn)定性的色譜數(shù)據(jù)管理系山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中，應(yīng)注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法： 1. 等電點(diǎn)沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì)，并能再度溶解而不變性。 3. 有機(jī)溶劑沉淀法 中性有機(jī)溶劑如乙醇、**，它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低，進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái)，因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì)。此外，有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層，促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性，使用該法時(shí)，要注意在低溫下操作.

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)作為分離的基礎(chǔ)。離子交換纖維素（cellulose ion-exchanger）是人工合成的纖維素衍生物，它具有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有較大的表面積，使蛋白質(zhì)大分子可以自由通過(guò)。因此常用于蛋白質(zhì)的分離。 （1）羧甲基纖維素（CM-纖維素） 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團(tuán)。在中性pH條件下，羧甲基上的質(zhì)子可解離下來(lái)（圖2-27a），而溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負(fù)電荷結(jié)合。可交換的基團(tuán)帶正電，因此是一種陽(yáng)離子交換劑。蛋白質(zhì)與離子交換纖維素之間結(jié)合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團(tuán)之間靜電吸引。 (2）二乙氨基乙基纖維素（DEAE-纖維素） 在中性pH條件下，它含有帶正電荷的基團(tuán)，可與溶液中的帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，可交換的基團(tuán)帶負(fù)電荷，因此是一種陰離子交換劑。當(dāng)某一蛋白質(zhì)混合溶液通過(guò)裝有DEAE-纖維素的層析柱時(shí)，帶正電荷的蛋白質(zhì)不能結(jié)合而隨著洗脫液的流動(dòng)先被洗脫下來(lái)。帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)將被結(jié)合到柱上。結(jié)合力取決于彼此相反電荷基團(tuán)間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強(qiáng)度的緩沖液進(jìn)行洗脫，改變蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷，依次從層析柱流出達(dá)到相互分離的目的。

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進(jìn)一步分離純化 用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過(guò)濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過(guò)濾層析 凝膠過(guò)濾層析（gel-filtration chromatography）又稱(chēng)為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個(gè)柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，不同類(lèi)型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時(shí)，比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)，而大于網(wǎng)孔的分子則不能進(jìn)入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時(shí)，被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過(guò)凝膠之間的縫隙先被洗脫下來(lái)，而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長(zhǎng)，而且受到來(lái)自凝膠內(nèi)部的阻力也很大，所以蛋白質(zhì)越小，從柱子上洗脫下來(lái)所需時(shí)間越長(zhǎng)。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，進(jìn)入網(wǎng)孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時(shí)間不同，從而達(dá)到分離的目的。山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

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隨著現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，儀器儀表行業(yè)發(fā)生了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，再加上當(dāng)前計(jì)算機(jī)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，組建網(wǎng)絡(luò)而構(gòu)成實(shí)用的監(jiān)控系統(tǒng)，可以提高生產(chǎn)效率和共享信息資源方向發(fā)展。當(dāng)前儀器儀表行業(yè)產(chǎn)品發(fā)展呈現(xiàn)微型化、多功能化、智能化、網(wǎng)絡(luò)化四大發(fā)展趨勢(shì)。在計(jì)算機(jī)和互聯(lián)網(wǎng)的急速發(fā)展到整個(gè)世界的背景下，儀器儀表也開(kāi)始向網(wǎng)絡(luò)化突進(jìn)，結(jié)合新的科技設(shè)備，通過(guò)廣域網(wǎng)和局域網(wǎng)直接操控儀器儀表，對(duì)公司的管理，經(jīng)營(yíng)一體化，應(yīng)用模式的分析等各大方面產(chǎn)生影響。其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)通過(guò)網(wǎng)絡(luò)這個(gè)平臺(tái)與客戶(hù)直接的交流，突破了世界和空間的限制，行家遠(yuǎn)程操控對(duì)儀器儀表進(jìn)行維護(hù)和分析。高科技的產(chǎn)品也隨之而來(lái)。工業(yè)領(lǐng)域轉(zhuǎn)型升級(jí)、提升發(fā)展質(zhì)量等有利于儀器儀表行業(yè)的發(fā)展；**安全、社會(huì)安全、產(chǎn)業(yè)和信息安全等需要自主、蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵裝備，成為全社會(huì)共識(shí)；隨著中國(guó)的不斷進(jìn)步，世界上只有一個(gè)救世主——市場(chǎng)，能救企業(yè)的只有你自己——自強(qiáng)，提高生產(chǎn)型重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力才是中國(guó)制造業(yè)的獨(dú)一出路。以顯微科學(xué)儀器行業(yè)的發(fā)展與變化為例，以親身的實(shí)踐為例，毛磊認(rèn)為，隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，我國(guó)的環(huán)境和實(shí)力都發(fā)生了巨大變化，有了完全不同的基礎(chǔ)，這為國(guó)產(chǎn)科學(xué)儀器走向**增強(qiáng)了信心。山東樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

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