所需儀器：

-86℃超低溫冰箱

離心機(jī)

生物安全柜

電動移液器

CO2培養(yǎng)箱

倒置顯微鏡

液氮罐

所需試劑：

胎牛血清（FBS）

細(xì)胞培養(yǎng)級 DMSO

凍存液：80%FBS+**MSO

無菌 1×PBS pH=7.2

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

異丙醇

所需耗材：

離心管（15ml、50ml）

T-25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶

一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）

8ml 凍存管

程序降溫盒

操作步驟：

將需要那凍存的細(xì)胞從 CO2培養(yǎng)箱中取出，在生物安全柜內(nèi)，濟(jì)南程序凍存盒多少錢，打開培養(yǎng)瓶瓶口，

吸棄瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

向培養(yǎng)內(nèi)加入無菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)瓶，使 PBS

能夠浸潤到培養(yǎng)平面上所都的面積，濟(jì)南程序凍存盒多少錢，吸棄 PBS；

重復(fù)步驟 2 一次，之后向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，濟(jì)南程序凍存盒多少錢，輕微震蕩后放入 37℃CO2培養(yǎng)

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箱中孵育 2-4min；

孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，如還有部分細(xì)胞為消化下

可在生物安全柜內(nèi)用移液管吸起消化液，吹打培養(yǎng)平面；

向消化下細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，然后將培養(yǎng)

瓶中的液體轉(zhuǎn)入 15ml 離心管中，300g 離心 5min；

離心完成后，棄上清，用 0.5mlFBS 重懸細(xì)胞，再加入 0.5ml 凍存液，用移液

管充分混勻，之后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。 四川科默斯凍存盒廠家杭州科默斯科技有限公司與客戶愉快合作，互利雙贏。

凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進(jìn)去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊。)

根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。

經(jīng)驗2：我們實(shí)驗室凍存盒平時放4度，需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯的。

經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹?液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

本實(shí)用新型一種簡易細(xì)胞凍存盒，包括底座支撐板，凍存盒體和凍存盒蓋，底座支撐板的板面上開設(shè)有凹槽結(jié)構(gòu)；所述凍存盒體裝設(shè)底座支撐板上的凹槽內(nèi)；凍存盒體與凍存盒蓋配合安裝；凍存盒體的盒體內(nèi)開設(shè)有第二凹槽結(jié)構(gòu)，凍存盒蓋的盒蓋內(nèi)開設(shè)有第三凹槽結(jié)構(gòu)，第二凹槽和第三凹槽內(nèi)均設(shè)有保溫層結(jié)構(gòu)；凍存盒體內(nèi)配合安裝有支撐凍存架；支撐凍存架上開設(shè)有若干凍存管孔。其中，凍存盒體和凍存盒蓋均為圓柱形結(jié)構(gòu)，凍存盒體的直徑尺寸與凍存盒蓋的直徑尺寸相配合。杭州科默斯科技有限公司自檢互檢，確保產(chǎn)品零缺點(diǎn)。

使用經(jīng)驗（*供參考）：雖然梯度降溫的起始點(diǎn)是室溫20°左右，但是凍存液里面的DMSO對細(xì)胞0性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先預(yù)放至4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放入凍存盒后，立刻轉(zhuǎn)移到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮。凍存盒中的異丙醇應(yīng)使用5~7此后更換一次，而且保證液體量不低于250ml刻度線，否則降溫效果會受到影響。異丙醇：無色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹浴?液體，熔點(diǎn)是-87.9度。請注意其可燃性!杭州科默斯科技有限公司杭州科默斯科技有限公司從實(shí)際出發(fā)，立足當(dāng)下。四川科默斯凍存盒廠家

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進(jìn)一步的，凍存盒體2和凍存盒蓋3均為圓柱形結(jié)構(gòu)，凍存盒體2的直徑尺寸與凍存盒蓋3的直徑尺寸相配合。

進(jìn)一步的，凹槽101結(jié)構(gòu)、第二凹槽201結(jié)構(gòu)和第三凹槽301結(jié)構(gòu)均為柱形槽結(jié)構(gòu)；凹槽101的開口直徑尺寸與凍存盒體2的外徑尺寸相配合；第二凹槽201的開口直徑尺寸與第三凹槽301的開口直徑尺寸相配合。

進(jìn)一步的，保溫層5結(jié)構(gòu)為棉花材質(zhì)材料板。

進(jìn)一步的，支撐凍存架4為泡沫材質(zhì)的架板；支撐凍存架4為圓柱型結(jié)構(gòu)架板。

下面為本實(shí)用新型的具體實(shí)施例：

支撐凍存架4裝配在凍存盒體2的第二凹槽201內(nèi)，凍存盒蓋3裝配在凍存盒體2開設(shè)第二凹槽201的端面上，第二凹槽201與第三凹槽301相連通，保溫層5裝配在第二凹槽201和第三凹槽301內(nèi)，凍存盒體2裝配在底座支撐板1的凹槽101內(nèi)。

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杭州科默斯科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù)，以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。杭州科默斯科技作為計算機(jī)硬件，儀器儀表，機(jī)電設(shè)備，電子產(chǎn)品，CellHome(程序降溫盒）；CoolHome(無冰工作站）；HolderHome(無冰冷凍箱）；TransHome(干冰運(yùn)輸箱）；BlockHome(模塊基 座）；IceHome(冰盆冰桶）細(xì)胞程序降溫盒的企業(yè)之一，為客戶提供良好的程序降溫盒，梯度降溫盒，無冰工作站，低溫工作站。杭州科默斯科技繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路，既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長，又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。杭州科默斯科技始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)行業(yè)。滿足市場需求，提高產(chǎn)品價值，是我們前行的力量。

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