箱中孵育 2-4min；

孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下

可在生物安全柜內用移液管吸起消化液，吹打培養平面；

向消化下細胞的培養瓶中加入 1ml 含血清的完全培養基終止消化，然后將培養

瓶中的液體轉入 15ml 離心管中，300g 離心 5min；

離心完成后，棄上清，用 0.5mlFBS 重懸細胞，再加入 0.5ml 凍存液，用移液

管充分混勻，河南梯度凍存盒圖片，之后轉入 1.8ml 凍存管中；

將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

第二天，河南梯度凍存盒圖片，河南梯度凍存盒圖片，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。 杭州科默斯科技有限公司期待著與志同道合的同仁精誠合作。河南梯度凍存盒圖片

一種程序降溫盒，其特征在于：包括降溫盒主體1、盒蓋3、凍存管架4，所述降溫盒主體1內壁固定一層保溫棉2，所述凍存管架4裝在降溫盒主體1上部，所述降溫盒主體1與凍存管架4之間有中空層5。本實施例中，所述降溫盒主體1為圓柱體盒體。本實施例中，所述中空層5中放置異丙醇。本實施例中，所述凍存管架4上設置15-20個容納凍存管的柱形凹腔41。本實施例中，所述降溫盒主體1、盒蓋3、凍存管架4均采用高密度聚乙烯PE材料制成。本實施例中，所述降溫盒主體1、盒蓋3通過螺紋結構連接。河南梯度凍存盒圖片杭州科默斯科技有限公司提供誠信質量服務，構建和諧文明窗口。

應該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應該現在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞0性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉入液氮。

所需儀器：

-86℃超低溫冰箱

離心機

生物安全柜

電動移液器

CO2培養箱

倒置顯微鏡

液氮罐

所需試劑：

胎牛血清（FBS）

細胞培養級 DMSO

凍存液：80%FBS+**MSO

無菌 1×PBS pH=7.2

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

異丙醇

所需耗材：

離心管（15ml、50ml）

T-25 細胞培養瓶

一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）

8ml 凍存管

程序降溫盒

操作步驟：

將需要那凍存的細胞從 CO2培養箱中取出，在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，

吸棄瓶內的培養基；

向培養內加入無菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培養瓶，旋轉震蕩培養瓶，使 PBS

能夠浸潤到培養平面上所都的面積，吸棄 PBS；

重復步驟 2 一次，之后向瓶內加入消化液 1ml，輕微震蕩后放入 37℃CO2培養

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上述的一種程序降溫盒，其特征在于：所述降溫盒主體為圓柱體盒體。上述的一種程序降溫盒，其特征在于：所述中空層中放置異丙醇。上述的一種程序降溫盒，其特征在于：所述凍存管架上設置15-20個容納凍存管的柱形凹腔。上述的一種程序降溫盒，其特征在于：所述降溫盒主體、盒蓋、凍存管架均采用高密度聚乙烯PE材料制成。上述的一種程序降溫盒，其特征在于：所述降溫盒主體、盒蓋通過螺紋結構連接。本實用新型的有益效果是：本實用新型在凍存管架上設置多個容納凍存管的柱形凹腔，一次性冷凍的細胞液較多，便于批量處理，效率較高。降溫盒主體內壁固定一層保溫棉，避免細胞液溫度過快的下降對細胞造成的損傷，同時主體與凍存管架之間加入異丙醇后，可實現-1℃/分的冷凍率，更進一步減緩冷凍時間，實現程序化冷凍，有利于保護細胞，提高存活率。杭州科默斯科技有限公司與客戶愉快合作，互利雙贏。河南梯度凍存盒圖片

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